非标记定量（LFQ）是一种无需对样品进行同位素或荧光标记的定量蛋白质分析技术。通过质谱仪对样品中肽段的相对丰度进行定量分析，LFQ能够在保持样品结构原貌的同时，提供高灵敏度、高通量的蛋白质定量信息。 非标记定量（LFQ）的核心在于通过分析蛋白质在不同样品或处理条件下的相对丰度变化，揭示潜在的生物学机制。相比于传统的标记定量法，LFQ技术操作简单，成本低廉，且不受标记效率影响，能够在不改变蛋白质结构的前提下进行分析。此外，LFQ在研究复杂生物体系中的动态变化及生物标志物发现方面具有独特的优势。通过LFQ，研究人员可以快速识别和定量复杂样品中的蛋白质，从而更好地理解细胞功能、疾病机制和药物作用。

一、非标记定量（LFQ）原理

1、信号强度法

蛋白质经胰酶酶切成肽段，再经液相色谱分离，利用电喷雾离子源产生气相离子，质谱仪按质荷比分离并记录。在一级质谱图中，母离子的信号强度与离子浓度相关，提取鉴定肽段对应的离子峰强度，如峰高度、峰面积和峰容积等，可反映肽段丰度，进而反映蛋白质丰度。

2、谱图计数法

样品中蛋白质丰度越高，酶切产生的肽段越多，经质谱分析，鉴定到的唯一匹配肽段及对应的二级谱图数也越多。通过直接统计蛋白质所有肽段的二级谱图数总和来反映蛋白质丰度。

二、技术流程

1、蛋白质提取与制备

非标记定量（LFQ）分析的首要步骤是从生物样品中提取总蛋白，并通过一系列分离与纯化步骤去除杂质。这包括细胞裂解、离心、滤过等过程，以确保获得高质量的蛋白样品。

2、肽段酶解

提取的蛋白质通常通过胰蛋白酶等特异性酶切割成肽段。这一过程需在严格控制的条件下进行，以确保酶解的效率及准确性，从而影响后续的定量分析。

3、质谱分析

非标记定量的核心技术是质谱分析。通过液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS），研究人员可以对肽段进行分离和检测。质谱仪根据肽段的质荷比（m/z）进行分辨，记录每个肽段的信号强度，为后续的定量分析提供基础。

4、数据处理与分析

质谱数据的处理是LFQ分析中的关键步骤。通过专业的软件工具，研究人员可以对原始数据进行校正、归一化和差异分析，以识别样品间蛋白质相对丰度的变化。

三、常见问题

1、样品差异

非标记定量（LFQ）分析的准确性依赖于样品间的一致性。因此，在样品处理和制备过程中，需严格控制操作条件，避免引入实验误差。

2、信号噪音

质谱分析中，背景噪音和离子抑制效应可能影响定量结果的准确性。优化质谱参数及提高样品纯度是降低噪音的一种有效途径。

3、生物重复

由于生物系统的复杂性，LFQ分析需进行多次生物重复，以增加实验的可靠性和统计学意义。

非标记定量（LFQ）能够检测和定量在不同样品中低丰度的蛋白质，为生物标志物的发现提供可能。无需标记步骤，LFQ能够分析大量样品，适用于大规模蛋白质组定量研究。 在非标记定量（LFQ）技术的支持下，百泰派克生物科技为客户提供领先的蛋白质组学分析服务。我们拥有丰富的经验和专业的技术团队，能够提供高质量的LFQ服务，助力您的科研项目。无论是基础研究还是应用开发，我们都致力于为客户提供定制化的解决方案，期待与您携手合作。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

>>点击了解更多优质服务项目